نوع مقاله : مقاله پژوهشی
نویسندگان
1 دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه علوم دامی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج
2 دامپزشکی علوم دامی
3 دانشیار، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی
4 استادیار، گروه علوم دامی، پردیس کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه تهران، کرج
چکیده
این پژوهش به‌منظور مقایسۀ تأثیر افزودن سطوح مختلف سه نوع سرمامحافظ نفوذی (گلیسرول، دی متیل استامید، دی متیل فرمامید) و دو نوع سرمامحافظ غیرنفوذی (ترههالوزو ساکارز) به رقیقکنندۀ اسپرم اسبهای ترکمن انجام شد. برای این منظور چهار سر نریان بالغ ترکمن برای اسپرمگیری به کار گرفته شد. پس از گرفتن مایع منی و فرآوری آن به‌منظور جداسازی ژل و پلاسمای منی در آزمایشگاه، نمونههای منی به گروههای تیماری شامل سطوح 5 و 7 درصد سرمامحافظهای نفوذی گلیسرول، دی متیل استامید (DMA) و دی متیل فرمامید (DMF) و سطوح 50 و 100 میلی مول سرمامحافظهای غیرنفوذی ترههالوز و ساکارز حل‌شده در رقیقکننده تقسیم و با یک روش استاندارد، منجمد شدند. پس از یخگشایی، فراسنجههای جنبایی و زندهمانی برای همۀ تیمارها ارزیابی شد. نتایج این پژوهش نشان داد، زندهمانی اسپرمهای منجمدشده با رقیقکنندۀ حاوی 5 یا 7 درصد DMF (بهترتیب 93/0±6/68 و 22/2±2/63 درصد) و سطوح 5 یا 7 درصد DMA (به ترتیب 69/1±6/68 و 76/2±6/63 درصد) از اسپرمهای منجمدشده با رقیقکنندۀ حاوی سطوح 5 یا 7 درصد گلیسرول (به ترتیب 06/3±8/56 و 03/1±6/55 درصد) به‌طور معنیداری بهتر بود (05/0P<). جنبایی کل اسپرمهای تیمارشده با سطح 5 درصد DMA (02/1±4/68 درصد) نسبت به سطح 7 درصد DMF (46/1±8/61 درصد) به‌طور معنیداری افزایش نشان داد (05/0P<). همچنین زندهمانی و جنبایی اسپرمها تحت تأثیر نوع سرما محافظهای غیر نفوذی قرار نگرفته و این سرما محافظها تفاوت معنیداری نسبت به هم نشان ندادند (05/0P>). بر پایۀ این نتایج میتوان گفت که سرما‌محافظ‌هایی مانند DMA و DMF میتوانند جایگزین مناسبی برای گلیسرول باشند.
کلیدواژه‌ها
عنوان مقاله [English]
The effect of addition of different levels of permeable and non-permeable cryoprotectants on freezing capacity of stallions sperm
نویسندگان [English]
- Farhad Vafayi 1
- ahmad zareh 2
- Hamid Kohram 3
- Afshin Seifi-jamadi 4
1 M.Sc. Student, University College of Agriculture & Natural Resources, University of Tehran, Karaj, Iran
3 Associate Professor, Facility members of Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran
4 ssistant Professor, University College of Agriculture & Natural Resources, University of Tehran, Karaj, Iran
چکیده [English]
The aim of this study was to evaluate the effect of addition of three different permeable (Glycerol, Dimethyl formamide and Dimethyl acetamid) and two different non-permeable cryoprotectant (Trehalose and sucrose) to the extender on freezing capacity of Turkmen stallions’ sperm. Four healthy mature Turkmen stallions (8-10 years old) were used. Collected semen from stallions were processed and pooled after gel removal and before allocating to treatments [glycerol, dimethyl formamide and dimethyl acetamid (5 or 7 percent) and trehalose or sucrose (50 and 100 mM)]. The prepared treatments were frozen according to a standard method. After thawing viability and motility of all treatments were accessed.The results showed that the viability and motility of spermatozoa treated with extender containing 5 or 7 % dimethyl formamide (68.6 ± 0.93 and 63.2 ± 2.22 respectively) or dimethyl acetamid (68.6 ± 1.69 and 63.6 ± 2.76 respectively) were significantly higher than those which treated with 5 or 7 % glycerol (56.8 ± 3.06 and 55.6 ± 1.03 respectively) (P<0.05). Also, results showed that the viability and motility of stallion spermatozoa were not influenced by the non-permeable cryoprotectants (P<0.05).We concluded that dimethyl acetamid and dimethyl formamide can be proper alternatives for glycerol as a common stallion spermatozoa cryoprotectant and the sucrose and trehalose had no significant effect on the stallion sperm quality after freeze-thawing process.
کلیدواژه‌ها [English]
- CASA
- cryoprotectant
- extender
- Sperm
- stallion
- Álvarez, C., Gil, L., González, N., Olaciregui, M. & Luño, V. (2014). Equine sperm post-thaw evaluation after the addition of different cryoprotectants added to INRA 96 extender. Cryobiology, 6, 144-148.
- El-Sheshtawy, R. I., Sisy, G. A. & El-Nattat, W. S. (2015). Effects of different concentrations of sucrose or trehalose on the post-thawing quality of cattle bull semen. Asian Pacific Journal of Reproduction, 4, 26-31.
- Evans, G. & Maxwell, W. C. (1987). Salamons' artificial insemination of sheep and goats. Butterworths.
- Fayrer-Hosken, R., Abreu-Barbosa, C., Heusner, G. & Jones, L. (2008). Cryopreservation of stallion spermatozoa with INRA96 and glycerol. Journal of Equine Veterinary Science, 28, 672-676.
- Fernández-Santos, M. R., Esteso, M. C., Montoro, V., Soler, A. J. & Garde, J. J. (2006). Cryopreservation of Iberian red deer (Cervus elaphus hispanicus) epididymal spermatozoa: effects of egg yolk, glycerol and cooling rate. Theriogenology, 66, 1931-1942.
- Glazar, A. I., Mullen, S. F., Liu, J., Benson, J. D., Critser, J. K., Squires, E. L. & Graham, J. K. (2009). Osmotic tolerance limits and membrane permeability characteristics of stallion spermatozoa treated with cholesterol. Cryobiology, 59, 201-206.
- Guay, P., Rondeau, M. & Bucher, S. (1981). Effect of glycerol on motility, viability, extracellular aspartate aminotransferase release and fertility of stallion semen before and after freezing. Equine Veterinary Journal, 13, 177-182.
- Hammerstedt, R. H., Graham, J. K. & Nolan, J. P. (1990). Cryopreservation of mammalian sperm: what we ask them to survive. Journal of Andrology, 11, 73-88.
- Malo, C., Gil, L., Gonzalez, N., Martínez, F., Cano, R., De Blas, I. & Espinosa, E. (2010). Anti-oxidant supplementation improves boar sperm characteristics and fertility after cryopreservation: comparison between cysteine and rosemary (Rosmarinus officinalis). Cryobiology, 61(1) 142-147.
- Metcalf, E. S., Dideon, B. A., Blehr, R., Schlimgen, T., Bertrand, W., Varner, D. D. & Hausman, M. S. (2008). Effects of DMSO and L-Ergothioneine on post-thaw semen parameters in stallions: Preliminary results. Animal Reproduction Science, 107, 332-333.
- Morris, G. J., Faszer, K., Green, J. E., Draper, D., Grout, B. W. W. & Fonseca, F. (2007). Rapidly cooled horse spermatozoa: loss of viability is due to osmotic imbalance during thawing, not intracellular ice formation. Theriogenology, 68, 804-812.
- Peña, F. J., García, B. M., Samper, J. C., Aparicio, I. M., Tapia, J. A. & Ferrusola, C. O. (2011). Dissecting the molecular damage to stallion spermatozoa: The way to improve current cryopreservation protocols? Theriogenology, 76, 1177-1186.
- Purdy, P. H. (2006). A review on goat sperm cryopreservation. Small Ruminant Research, 63, 215-225.
- Salamon, S. & Maxwell, W. M. C. (2000). Storage of ram semen. Animal Reproduction Science, 62, 77-111.
- Seifi-Jamadi, A., Ahmad, E., Ansari, M. & Kohram, H. (2017). Antioxidant effect of quercetin in an extender containing DMA or glycerol on freezing capacity of goat semen. Cryobiology, 75, 15-20.
- Seifi-Jamadi, A., Kohram, H., Shahneh, A. Z., Ansari, M. & Macías-García, B. (2016). Quercetin Ameliorate Motility in Frozen-Thawed Turkmen Stallions Sperm. Journal of Equine Veterinary Science, 45, 73-77.
)